Respuestas de las células T

En los cánceres, las células T específicas de antígeno facilitan la inmunidad antitumoral al dirigirse a las células tumorales que expresan o presentan determinados antígenos. Por lo tanto, los métodos para una medición específica de dichas poblaciones de células T son muy necesarios en el proceso de desarrollo de tratamientos inmunológicos oncológicos innovadores.

Las células T específicas de antígeno están implicadas en la mayoría de los cánceres y en muchas enfermedades autoinmunes.

La inmunogenicidad de los antígenos putativos está sujeta a muchas limitaciones intrínsecas, como el repertorio de células T del paciente. Se estima que hay aproximadamente 108 clones diferentes de células T presentes en un individuo sano (Ref: Arstila et al., 1999, Science), por lo que el clon individual tiene una frecuencia diminuta. Por lo tanto, es un reto establecer métodos para medir la frecuencia de las células T específicas de antígeno. Existen tres métodos comunes para medir dichas poblaciones de células T específicas, a saber, el método Enzyme-Linked ImmunoSpot (ELISPOT), la tinción de citoquinas intracelulares (ICS) basada en la citometría de flujo y el método de tinción de multímeros MHC también basado en la citometría de flujo. Tanto el método ELISPOT como el ICS se basan en la estimulación in vitro antes de medir la secreción de citoquina(s). El método ELISPOT, en la mayoría de los casos, sólo mide el IFN-γ (detección de una sola citoquina) mientras que el ensayo ICS se ocupa frecuentemente de medir el IFN-γ, el TNF-α y la IL-2 (detección de múltiples citoquinas) en un contexto de células T efectoras. Obviamente, con ambos métodos sólo se pueden detectar las células que secretan citoquinas en las condiciones de estimulación aplicadas.

Por el contrario, la tinción MHC multimer representa un método para la medición directa ex vivo de las células T específicas de antígeno sin necesidad de estimulación. Mientras que los métodos ELISPOT e ICS se basan en la suposición de que las células activadas medidas son idénticas a las células específicas del antígeno, el método MHC multimer supera esta limitación. Sin embargo, la detección de células T específicas de antígeno mediante el método de tinción MHC multimérica requiere conocer los tipos de tejido del paciente y el posible epítopo o epítopos mínimos de células T que se deben detectar. 

Una ventaja de los métodos de tinción del ICS y del MHC multimer es la co-tinción de los marcadores de linaje de las células T y posiblemente de otros marcadores de superficie o intracelulares, por ejemplo, implicados en la maduración, la inhibición o la activación, lo que aumenta el nivel de conocimiento obtenido. Al realizar mediciones de citometría de flujo multicolor y de ICS, podemos proporcionar datos valiosos de las capacidades de producción de citocinas de las células T específicas de antígeno de las muestras de los pacientes. Los métodos de tinción de ICS y MHC multimer siempre se combinan con los marcadores de linaje de células T y, además, ofrecemos la adición de la medición del fenotipo de maduración para diferenciar el análisis de la producción de citocinas o las poblaciones de células MHC multimer positivas en función del linaje de las células T y el estado de maduración.

Esta funcionalidad avanzada y flexible de los métodos de análisis de citometría de flujo es esencial en el desarrollo de las inmunoterapias modernas para investigar las respuestas inmunitarias observadas tras el tratamiento, mientras que el método ELISPOT sigue posicionándose como el más utilizado para la monitorización inmunitaria. En ImmuMap ofrecemos las tres estrategias para medir las respuestas específicas de las células T y estaremos encantados de ayudarle a elegir el método o métodos más adecuados para su estudio de desarrollo. Es importante destacar que estos tres ensayos son complementarios entre sí y cada uno tiene sus puntos fuertes como débiles.

El método ELISPOT se utiliza ampliamente en los laboratorios de todo el mundo para medir la producción de citoquinas por parte de las células T y ha obtenido el estatus de método estándar de oro en este campo. Sin embargo, es importante ser consciente de que este método presenta varios inconvenientes desde el punto de vista metodológico. Entre ellos, la necesidad de un periodo de estimulación que da una indicación distorsionada de la respuesta, normalmente la limitación para medir una citoquina a la vez, y la falta de fenotipado celular. Estos factores limitan la información proporcionada por ELISPOT, por lo que preferimos ofrecer paquetes de análisis que incluyan ELISPOT junto con mediciones basadas en citometría de flujo.

Todos nuestros métodos para la determinación de las poblaciones de células T específicas de antígeno pueden realizarse tanto en muestras criopreservadas como frescas.

ImmuMap proporciona ensayos basados en ELISPOT y citometría de flujo para el inmunofenotipado y la detección de células T específicas de antígeno basados en la tinción de multímeros del MHC o en la tinción de citoquinas intracelulares.

Respuesta de las células T_T Interacción con las células cancerosas

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ELISPOT

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